草兔卵透明带蛋白2的克隆与原核表达

• 作者: 周智敏 韩崇选
• 来源期刊: 西北林学院学报
• 关键词: 卵透明带 草兔 抗原表位 ZP2 诱导表达
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 森林保护学
• 页码范围: 181-187
• 页数: 7页
• 分类号: S764.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-7461.2016.02.31

摘要

哺乳动物卵透明带蛋白具有极强抗原性,产生的抗卵透明带蛋白抗体可以有效阻碍精卵结合.为了探究草兔卵透明带2 (zona pellucida 2,ZP2)蛋白抗原性,以及定位抗原表位.根据Gen-Bank上欧洲兔的卵透明带2基因序列,设计5 '端磷酸化的反转录引物用于合成特异cDNA作为模板,通过普通PCR扩增草兔ZP2基因.测序获得的2 184 bp序列比对成功后,预测其信号肽和跨膜区域分别位于Zp235-56和Zp2693-717.将克隆获得954 bp的hZP2基因连入pET-28a(+)的EcoR Ⅰ和Xho工酶切位点之间,成功构建了重组原核表达载体pET-28a-hZP2后转化大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)BL21.重组的E.coli BL21经诱导后表达41.17 kD可溶性的hZP2融合蛋白,经优化诱导表达体系后,确定较好的诱导条件是37℃下0.7 mmol·L-1 IPTG诱导15h.经Western blot鉴定,结果表明相对于表达ZP2大片段基因,hZP2融合蛋白表达量明显提高.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩崇选	西北农林科技大学林学院	97	1043	18.0	25.0
2	周智敏	西北农林科技大学林学院	3	1	1.0	1.0