藤黄生孢链霉菌NRRL 2401遗传操作系统和基因文库的构建

• 作者: 成雪晴 朱涛 由德林 邓子新
• 来源期刊: 微生物学报
• 关键词: 藤黄生孢链霉菌 接合转移 基因文库 PCR筛选
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 209-218
• 语种: 中文
• DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20150221

摘要

[目的]建立藤黄生孢链霉菌NRRL 2401的遗传操作系统和基因文库,以便筛选次级代谢产物生物合成基因.[方法]利用大肠杆菌和链霉菌的属间接合转移的方法,以整合型载体pPM927、pSET152和复制型载体pJTU1278构建链霉菌遗传操作系统.以pCClFOSTM载体,大肠杆菌EP1300TM-T1R为宿主菌构建Fosmid文库.随后,设计引物,利用"板池-行池-单克隆"的三级PCR方法对文库进行快速筛选.[结果]pPM927、pSET152和pJTU1278均成功转入藤黄生孢链霉菌NRRL 2401,其中pSET152载体的转化效率最高.构建了稳定高效的藤黄生孢链霉菌NRRL 2401的基因文库,含2880个克隆,平均插入片段大小约为35 kb,空载率小于1％,文库覆盖率为99.99％,覆盖基因组16.5倍.同时,初步筛选出可能含有吲哚霉素生物合成基因簇的9个阳性克隆.[结论]成功构建了稳定高效的藤黄生孢链霉菌NRRL2401遗传操作系统和高质量的基因文库,为克隆该菌中次级代谢产物生物合成基因簇以及进一步遗传改造奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱涛	上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室	13	43	4.0	6.0
2	邓子新	上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室	50	323	8.0	17.0
3	由德林	上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室	5	5	1.0	2.0
4	成雪晴	上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室	1	0	0.0	0.0