PMA-PCR方法快速检测VBNC状态青枯菌

• 作者: 于小龙 冯洁 张昊 徐进 王学利 胡晓梅 许景升 黄雯
• 来源期刊: 植物保护
• 学科: 农学
• 关键词: 青枯菌 叠氮溴化丙锭 活的非可培养状态
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 实验方法与技术
• 页码范围: 144-149
• 页数: 6页
• 分类号: S436.411
• 字数: 4651字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0529-1542.2016.01.026

摘要

青枯菌为应对逆境胁迫,可进入活的但非可培养状态(viable but non-eulturable,VBNC).本文利用叠氮溴化丙锭(PMA)与PCR技术相结合,建立了一种快速有效区分青枯菌死活细胞的分子检测方法.基于hrcS基因序列,设计了一对青枯菌种特异性检测引物hrcSf/hrcSr;利用PMA对青枯菌Po82菌株的细胞悬浮液样品进行预处理,随后进行常规PCR扩增.结果表明,当样品中PMA质量浓度为3 μg/mL、曝光时间大于5 min时,PMA可有效抑制死亡菌体细胞中的DNA扩增;且对可培养和VBNC状态细胞中的DNA扩增没有影响;本试验建立的PMA-PCR方法能有效对包括VBNC状态在内的青枯菌活菌进行检测,避免了假阳性与假阴性结果的产生.