甘蔗条纹花叶病毒 HC－Pro、P3N－PIPO、CP 和 VPg基因酵母双杂交诱饵表达载体的构建及自激活检测

• 作者: 彭磊 徐景升 杨永庆 程光远 翟玉山 邓宇晴 郑艳茹
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 甘蔗条纹花叶病毒 HC-Pro P3N-PIPO CP VPg 诱饵载体 酵母双杂交
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 页码范围: 83-89
• 页数: 7页
• 分类号: Q78
• 字数: 5405字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.2016.01.014

摘要

为探索甘蔗条纹花叶病毒与甘蔗的互作机制，利用酵母双杂交技术筛选与 SCSMV 互作的甘蔗因子基因，利用 PCR 技术克隆了 SCSMV 的 HC－Pro、P3N－PIPO、CP 和 VPg 的编码区，构建到酵母双杂交诱饵载体 pGBKT7上，获得了 pGBKT7－HC－Pro、pGBKT7－P3N－PIPO、pGBKT7－CP 和 pGBKT7－VPg 4个诱饵载体。结果显示，将重组质粒转化酵母 Y2HGold 酵母菌株后，酵母菌株在 SD／－Trp 平板上生长良好，表明重组诱饵质粒表达产物对酵母细胞无毒性；在SD／－Trp／X－α－gal 平板上长出白色菌落未变蓝，在 SD／－Leu、SD／－Trp／－Ade、SD／－Trp／－His 和 SD／－Trp／X－α－gal／AbA 平板上不能生长，表明重组诱饵质粒表达产物对 MEL1、ADE2、HIS3和 AUR1－C 报告基因无自激活作用。构建的诱饵表达载体可以作为诱饵用于文库筛选，为探索 SCSMV 侵染机制和发病机理奠定了基础。