原代小鼠肝细胞培养方法的比较

• 作者: 何志妮 李慧瑶 柏青 王庆 王方萍 王珊 陈丽萍 陈燊 陈雯
• 来源期刊: 癌变·畸变·突变
• 学科: 医学
• 关键词: 小鼠 原代肝细胞培养 二甲基亚砜 表皮生长因子
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 125-130
• 页数: 6页
• 分类号: R114
• 字数: 4018字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-616x.2016.02.009

摘要

目的:比较3种不同培养条件下原代小鼠肝细胞的形态以及肝细胞功能,寻找适合于原代小鼠肝细胞体外培养的培养基配方.方法:采用改良Seglen两步胶原酶灌注法分离原代小鼠肝细胞,糖原染色观察细胞纯度,在贴壁4h后用基础培养基、基础培养基加DMSO(DMSO组)、基础培养基加DMSO和EGF(DMSO+EGF组)等3种不同的条件培养肝细胞.镜下观察肝细胞形态,用MTT法检测细胞活力,生化分析仪检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)水平以及用ELISA法检测细胞培养上清液中白蛋白水平.结果:成功分离小鼠原代肝细胞,肝细胞纯度达95％以上;原代肝细胞培养至96 h时,DMSO组仍能较好地维持细胞形态,基础培养基组的细胞活力比DMSO组和DMSO+EGF组分别降低了66.87％和67.16％(P＜0.05),且基础培养基组的LDH水平均高于DMSO组和DMSO+EGF组(P＜0.05).此外DMSO组在96 h时仍能维持较高水平的白蛋白分泌,比基础培养基组和DMSO+EGF组分别增加了185％和24.2％(P＜0.05).结论:小鼠原代肝细胞培养基中加入DMSO对于维持肝细胞的形态和功能有促进作用,本研究为体外原代肝细胞培养模型的建立和优化提供了实用的方法.