虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei)实时荧光定量PCR检测方法的建立及对虾样品的检测

• 作者: 万晓媛 刘珍 张庆利 马芳 黄倢
• 来源期刊: 渔业科学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 实时荧光定量PCR 虾肝肠胞虫 SYBR Green Ⅰ
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 119-126
• 页数: 8页
• 分类号: S917
• 字数: 6639字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11758/yykxjz.20150512003

摘要

根据GenBank中公布的虾肝肠胞虫(Enterocytozoon hepatopenaei) (EHP) SSU rDNA序列设计1对特异性引物,建立并优化了EHP的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR (qPCR)检测方法.结果显示,该方法在60℃的退火温度时扩增效果最好,产物的熔解曲线为1个单峰,构建的方法对8.3×101-8.3×108 copies/μ1的EHP SSU rDNA片段的检测响应具有良好的线性关系,扩增产物阈值循环数(Ct)与模板起始量的对数[log(Sq)]的关系为Ct=-3.369 log(Sq)+39.364 (R2=0.992),扩增效率为98.1％,检测灵敏度下限为8.3× 10(1) copies/μ1,在线性范围内具有良好的组内和组间重复性.对实际样品的检测表明该方法比已报道的套式PCR的检测灵敏度约高4倍.利用本方法对采集自江苏、海南和山东的3批凡纳滨对虾样品的肝胰腺组织DNA (HpDNA)中的EHP SSU rDNA进行了qPCR检测,结果显示,EHP的载量指数与对虾生长速率呈负相关关系,肝胰腺中EHP载量在103 copies/(ng HpDNA)时代表了较高的风险水平.本研究建立的qPCR方法具有特异、灵敏、快速、定量的优点,所建立的方法及检测数据可为EHP的防控提供技术参考.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄倢	中国水产科学研究院黄海水产研究所	111	1805	25.0	37.0
2	刘珍	中国水产科学研究院黄海水产研究所	1	37	1.0	1.0
6	张庆利	中国水产科学研究院黄海水产研究所	1	37	1.0	1.0
10	万晓媛	中国水产科学研究院黄海水产研究所	1	37	1.0	1.0
11	马芳	中国水产科学研究院黄海水产研究所	1	37	1.0	1.0