用SDSL-EPR技术测量LSECtin-CRD与甘露糖结合过程中的位点运动性变化

• 作者: 丛建波 吴可 张成岗 杨俊涛 王长振 董国福 邹洁芮 郭俊旺 马蕾
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 定点自旋标记-电子顺磁共振技术(SDSL-EPR) 肝脏及淋巴结窦内皮细胞C型凝集素(LSECtin) 糖基识别结构域(CRD) 运动性
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 381-385
• 页数: 5页
• 分类号: Q503|Q789
• 字数: 3506字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2016.03.018

摘要

目的:应用定点自旋标记-电子顺磁共振(SDSL-EPR)技术检测肝脏及淋巴结窦内皮细胞C型凝集素(LSECtin)的糖基识别结构域CRD上不同位点氨基酸的运动特性及其与甘露耱结合过程中的构象变化.方法:通过SOE-PCR方法对LSECtin-CRD引入半胱氨酸点突变,构建pET28b-Tat-LSECtin-CRD载体,可溶性表达LSECtin-CRD突变体蛋白;对突变位点进行自旋标记;EPR检测标记后样品的EPR波谱;用SS-FDDM软件对EPR波谱进行模拟和解析,获得旋转相关时间τc,研究其构象特点及变化.结果:在CRD的Ca2+结合位点和配体结合功能区构建了5个突变体蛋白;LSECtin-CRD与Ca2+和甘露糖结合后,4个位点的τc值明显升高,表明CRD结构域整体运动性降低;5个突变位点运动性差异较大,其中A258位点运动性变化最大,可能是参与糖基结合的关键位点.结论:SDSL-EPR技术能够有效研究LSECtin-CRD参与糖基结合过程中的构象运动性,研究结果证明了LSECtin-CRD在与糖基结合后整体运动性受限.