猪流行性腹泻病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

• 作者: 何海建 劳秀杰 宋厚辉 王志亮 王晓杜 王晓洁 王静静 邵春艳 郑东霞
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 猪流行性腹泻病毒 N基因 实时荧光定量RT-PCR 检测
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 技 术 支 撑
• 页码范围: 62-66
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65
• 字数: 3460字
• 语种: 中文

摘要

根据GenBank报道的N基因高度保守核苷酸序列，设计并合成一对引物。上下游引物与GenBank中登录的153株猪流行性腹泻病毒（PEDV）N基因全长序列匹配度分别是100%和97%。以本实验室分离流行毒株为模板，利用SYBR Green I荧光染料法进行RT-PCR扩增，获得扩增产物构建重组质粒作为阳性对照，建立检测猪流行性腹泻病毒核酸的方法。同一样品进行3次重复试验，变异系数＜0.9%。通过对临床样品进行检测和测序验证，核酸检测结果中的阳性样品准确率为100%。本研究所建立的荧光定量PCR检测方法具有快速、灵敏、准确等优点，可用于临床PEDV的检测及分子流行病学调查。