题目：PGC-1α在CH1细胞中通过ATP和ROS调控细胞周期

• 来源期刊: 浙江大学学报（英文版）（B辑：生物医学和生物技术）
• 学科: 生物学
• 关键词: 过氧化物酶体增殖物受体 γ 共激活因子 1α(PGC-1α) 线粒体 氧化磷酸化 细胞周期 CyclinD1 CyclinB1
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 页码范围: 136-146
• 页数: 11页
• 分类号: Q25
• 语种: 英文

摘要

目的：探讨在 CH1细胞中过氧化物酶体增殖物受体γ共激活因子1α（PGC-1α）调控细胞周期时三磷酸腺苷（ATP）和活性氧（ROS）的作用机制。创新点：构建了稳定表达PGC-1α的CH1细胞株，并系统地研究了 PGC-1α调控细胞周期是通过 ATP 和ROS调节CyclinD1和CyclinB1的行使功能。方法：以慢病毒质粒 pBABE为载体构建了 PGC-1α稳定表达的CH1 PGC-1α细胞株（PGC-1α），同时转染空质粒pBABE作为对照（PB），结合RNA干扰CH1 PGC-1α中PGC-1α的过表达（Si），测定了ATP和ROS水平。用流式细胞术检测了细胞周期和免疫印迹检测了CyclinB1/D1的表达，并进一步分别用寡霉素抑制 PGC-1α细胞中的ATP生成，用H2O2处理细胞以增加外源ROS水平。然后检测ATP和ROS改变后，对CyclinB1/D1表达及细胞周期的影响，以明确ATP和ROS是否参与PGC-1α对细胞周期的调控作用。结论：本实验成功构建了稳定表达 PGC-1α的细胞株（图1和图2a），与PB对照和RNA干扰PGC-1α比较，过表达PGC-1α具有升高ATP、降低ROS和促进细胞周期的作用（图3和图4）。进一步用寡霉素抑制ATP合成后发现CyclinD1明显下调（图5），而加入H2O2增加外源ROS后发现CyclinB1显著上调（图6）。通过本实验我们提出PGC-1α调控细胞周期是通过升高ATP水平抑制CyclinD1表达和降低ROS水平促进CyclinB1表达来实现。