小麦 TaGAPC 定点突变体基因载体构建及其原核表达

• 作者: 曾令锋 杨淑慎 翟清华 邓西平 郭子平
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: TaGAPC 重叠延伸 PCR 定点突变 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 页码范围: 46-50
• 页数: 5页
• 分类号: Q78|S512.03
• 字数: 4771字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.2016.01.008

摘要

为了研究催化活性半胱氨酸 Cys 154、Cys 158残基对小麦细胞质甘油醛－3－磷酸脱氢酶（TaGAPC）蛋白酶活性的影响，利用重叠延伸 PCR 法分别将这2个位点的半胱氨酸突变成丝氨酸，并分别连入 pET28a（＋）原核表达载体。在25℃条件下，TaGAPC 及其定点基因 TaCys154S／TaCys158S 经0．25 mmol／L IPTG 诱导后高效表达，SDS－PAGE 电泳检测结果显示，目标重组蛋白均为可溶性且大小约为40 kDa，与预测结果一致。在此基础上，经超声波破菌及镍柱纯化获得3种纯化重组蛋白。这为后续 TaGAPC 及其定点突变体蛋白酶活性测定及活性位点分析提供试验材料。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨淑慎	西北农林科技大学生命科学学院	46	699	11.0	25.0
2	郭子平	西北农林科技大学生命科学学院	1	4	1.0	1.0
3	翟清华	西北农林科技大学生命科学学院	2	5	1.0	2.0
4	曾令锋	西北农林科技大学生命科学学院	1	4	1.0	1.0