大片段两步同源重组敲除节杆菌肌酐酸脱氢酶基因质粒的构建

• 作者: 应汉杰 李楠 柳东 牛欢青 童鹏 郭亭
• 来源期刊: 生物加工过程
• 学科: 生物学
• 关键词: 节杆菌 环磷酸腺苷 同源重组 基因敲除
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 研究与开发
• 页码范围: 14-18,35
• 页数: 6页
• 分类号: Q784
• 字数: 2852字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3678.2016.01.003

摘要

构建一种新型的含有大片段同源臂的重组质粒用来对节杆菌进行代谢工程的改造.使用PCR扩增线性化载体片段,并通过酶切获取同源重组大片段,利用一步克隆技术将上述两片段连接起来;通过PCR-targeting将目标基因替换,并利用酶切自连将插入的片段删除,最后成功得到目标质粒pUK-dIMP.构建的质粒通过2次同源重组将目的基因肌酐酸脱氢酶(IMPDH)成功敲除,且最后菌株不合有任何抗性,开辟了一种针对节杆菌而言新型的基因改造方法.其中IMPDH基因缺失的菌株积累目标产物环磷酸腺苷的能力比对照菌株高49.7％,达到了(9.01±0.20) g/L.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李楠	南京工业大学生物与制药工程学院材料化学工程国家重点实验室	20	49	4.0	6.0
2	郭亭	南京工业大学生物与制药工程学院材料化学工程国家重点实验室	5	29	4.0	5.0
3	牛欢青	南京工业大学生物与制药工程学院材料化学工程国家重点实验室	2	4	1.0	2.0
4	童鹏	南京工业大学生物与制药工程学院材料化学工程国家重点实验室	1	3	1.0	1.0
5	柳东	南京工业大学生物与制药工程学院材料化学工程国家重点实验室	1	3	1.0	1.0