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摘要:
已报道PmrA-PmrB二元调控系统在革兰阴性菌对多黏菌素B耐药过程中起重要作用,基于此认识,作者拟从基因突变和mRNA表达两个方面探讨PmrA-PmrB介导大肠杆菌对黏杆菌素耐药的可能性.首先检测了临床分离的52株禽致病性大肠杆菌对黏杆菌素的敏感性,筛选出耐药菌株;然后采用step-wise方法对黏杆菌素敏感菌株进行诱导,获得人工诱导的耐药菌株;最后通过PCR扩增所有耐药菌株的pmrA-pmrB后采用Mega软件进行突变位点分析,并采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)技术检测所有耐药菌株中pmrA-pmrB的mRNA转录水平的变化,拟阐明PmrA-PmrB二元调控系统对禽致病性大肠杆菌黏杆菌素耐药性产生的作用.MIC结果显示,52株大肠杆菌中,虽然大多数菌株(88.5%,46/52)仍对黏杆菌素敏感,但也分离到少数耐药菌株(为11.5%).突变位点分析表明人工诱导成功的5株耐药菌(9R、36R、53R、91R和107R) pmrA未发生突变,而pmrB均有不同程度的突变,其中耐药菌株9R、36R和53R各在G55A (G19R)、T500C(L167P)和T263A(V88E)发生点突变,而91R和107R在229位和478位各插入长为30和189 bp的序列.但临床分离的6株耐药菌株(MIC=4~8 ug·mL-1)的pmrA-pmrB均未发生突变.qRT-PCR结果显示发生点突变的三株人工诱导耐药菌pmrA-pmrB转录量均极显著(P<0.01)或显著(P<0.05)上升,发生插入突变的两株耐药菌pmrA-pmrB转录量虽有上升趋势,但变化不显著(P>0.05),而临床耐药菌株(n=6)的pmrA-pmrB转录量均无变化.进一步检测人工诱导不同MIC的耐药菌株中pmrA-prnrB的突变位点,发现菌株MIC达16 μg·mL-1时pmrA-pmrB才会发生突变.PmrA和PmrB介导了大肠杆菌对黏杆菌素的高度耐药,其中PmrB的点突变伴随PmrA-PmrB的高表达或者PmrB的组氨酸激酶-腺苷酰环化酶甲基结合蛋白-磷酸化酶(HAMP)结构域的插入突变是导致禽致病性大肠杆菌对黏杆菌素高度耐药的机制之一.
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文献信息
篇名 PmrA-PmrB二元调控系统介导大肠杆菌对黏杆菌素耐药的机制研究
来源期刊 畜牧兽医学报 学科 农学
关键词 黏杆菌素耐药 大肠杆菌 pmrA-pmrB 突变
年,卷(期) 2016,(4) 所属期刊栏目 基础兽医
研究方向 页码范围 812-819
页数 8页 分类号 S859.7
字数 4497字 语种 中文
DOI 10.11843/j.issn.0366-6964.2016.04.022
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 黄金虎 南京农业大学动物医学院 8 29 3.0 5.0
2 王丽平 南京农业大学动物医学院 50 371 11.0 17.0
3 郭大伟 南京农业大学动物医学院 4 17 2.0 4.0
4 何方 南京农业大学动物医学院 4 5 1.0 2.0
5 葛琳 南京农业大学动物医学院 2 7 2.0 2.0
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畜牧兽医学报
月刊
0366-6964
11-1985/S
大16开
北京海淀区圆明园西路2号
82-453
1956
chi
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