抗菌肽LL-37的原核表达纯化及对假丝酵母菌的抑制作用

• 作者: 孙蓓 尹利荣 张步美 张萍萍 张钰娟 王芳 霍彦
• 来源期刊: 中华妇产科杂志
• 关键词: 念珠菌病,外阴阴道 内源性抗菌多肽类物质 重组融合蛋白质类 原核表达
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 120-125
• 页数: 6页
• 字数: 5865字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.0529-567x.2016.02.008

摘要

目的：研究抗菌肽LL-37通过促进阴道上皮细胞免疫因子的分泌抑制假丝酵母菌的作用。方法（1）构建LL-37原核表达载体pET-Duet/LL-37并在大肠埃希菌M15中诱导表达。对所表达的LL-37融合蛋白进行纯化及鉴定，并用K-B纸片法初步验证LL-37纯化蛋白的抗真菌活性。（2）纯化的LL-37蛋白加入到与假丝酵母菌共培养的人阴道上皮细胞[即外阴阴道假丝酵母菌病（VVC）阴道上皮细胞模型]中，并分为实验组与对照组（不加LL-37纯化蛋白），采用葡萄糖消耗法观察抑菌效果[以吸光度（A）值表示]。采用ELISA方法检测不同时间点干扰素γ（IFN-γ）、白细胞介素10（IL-10）水平及IFN-γ/IL-10比值的变化。结果（1）诱导表达的LL-37融合蛋白的浓度为433.92μg/ml，纯度达96%。K-B纸片法初步证实了LL-37纯化蛋白具有一定的抗真菌活性。（2）LL-37重组蛋白可明显抑制假丝酵母菌生长，实验组各时间点A值明显高于对照组（分别为：12 h：3.008±0.003、2.967±0.003；24 h：2.941±0.003、2.601±0.003；48 h：2.893±0.004、2.409±0.003），分别比较，差异均有统计学意义（P<0.01），并且随时间进展的下降趋势较对照组缓慢。两组IFN-γ、IL-10分泌水平均呈现先升后降的趋势，于24 h达高峰[实验组分别为：（104.00±1.07）、（108.4±0.7）pg/ml；对照组分别为：（85.17±0.28）、（151.6±0.6）pg/ml]。各时间点比较，实验组IFN-γ水平于24 h时明显高于对照组（P<0.01）；各时间点的IL-10水平均低于对照组（P<0.01），且IFN-γ/IL-10比值均高于对照组（P<0.01）。结论（1）LL-37重组蛋白对假丝酵母菌具有明显的抑制作用。（2）LL-37重组蛋白通过影响IFN-γ、IL-10等免疫因子的分泌，调整阴道上皮细胞局部免疫，增强抵抗假丝酵母菌感染的能力。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙蓓	天津医科大学内分泌研究所	48	174	8.0	10.0
2	霍彦	300211天津医科大学第二医院计划生育科	3	7	2.0	2.0
3	王芳	300211天津医科大学第二医院妇科	2	4	1.0	2.0
4	尹利荣	300211天津医科大学第二医院妇科	2	4	1.0	2.0
5	张萍萍	300211天津医科大学第二医院妇科	2	4	1.0	2.0
6	张钰娟	300211天津医科大学第二医院计划生育科	1	3	1.0	1.0
7	张步美	300211天津医科大学第二医院计划生育科	2	6	2.0	2.0