重组人KGF-1蛋白的表达、纯化及活性研究

• 作者: 周昭 宋礼华 范清林
• 来源期刊: 生物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 重组人角质细胞生长因子-1 SUMO蛋白 原核表达
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 13-16,20
• 页数: 5页
• 分类号: Q789
• 字数: 4061字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1736.2016.01.013

摘要

在大肠杆菌中表达可溶性的重组人rhKGF-1蛋白，研究其生物学活性，为rhKGF-1蛋白进一步制药提供基础。合成ΔN23 rhKGF-1（N端缺失23个氨基酸残基的rhKGF-1形式）的基因序列，应用重叠PCR技术，将其与poly His-sumo标签基因序列拼接。构建重组表达质粒pET30a-6His-sumo-rhKGF1，转入E．coli BL21（DE3）中，表达融合蛋白。融合蛋白经Ni-NTA纯化后，切除SUMO标签，再经Ni-NTA纯化获得ΔN23 rhKGF-1蛋白。 CCK-8法测定其对人永生化表皮细胞（HaCat细胞）的促增殖作用。结果表明，成功构建了pET30a-6His-sumo-rhKGF1表达质粒，测序结果与预期一致。实现了融合蛋白在E．coli BL21（DE3）中的可溶性表达，经纯化、酶切获得了ΔN23 rhKGF-1蛋白。制备的ΔN23 rhKGF-1蛋白具有促进HaCat细胞增殖的作用，EC50＝6.11 ng／mL。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋礼华		31	188	7.0	12.0
2	范清林		17	114	5.0	10.0
3	周昭	安徽大学生命科学学院	1	1	1.0	1.0