合成角质细胞生长因子活性短肽促进表皮细胞增殖的实验研究

• 作者: 姜笃银 宋国栋 宗宪磊 李国菊 祁佐良 都乐 陆海滨 靳小雷
• 来源期刊: 组织工程与重建外科杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 噬菌体随机7肽库 角质细胞生长因子 活性短肽 表皮细胞 创面愈合
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: Q813.1+1
• 字数: 4629字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-0364.2016.01.001

摘要

目的 应用噬菌体随机7肽库筛选角质细胞生长因子(Keratinocyte growth factor,KGF)的关键序列,进行KGF活性短肽的调整和合成,并研究其对表皮细胞增殖的作用.方法 以KGF单克隆抗体为靶,筛选噬菌体随机7肽库,获得KGF的特异性序列,并进行序列调整.用免疫荧光法检测KGF活性短肽的表皮细胞亲和力.用CCK-8法检测KGF活性短肽对表皮细胞增殖的影响.用RT-PCR法和Western-blot法检测表皮细胞上特异性受体KGFR的表达水平.结果 筛选噬菌体随机7肽库,获得2个与KGF相似的特异性序列,合成获得2个KGF活性短肽,并纯化至98%纯度,短肽的C端进行氨基化封闭,N端进行罗丹明激光染料标记.免疫荧光检测结果显示,2个KGF活性短肽均能够与表皮细胞相结合.CCK-8检测结果显示,与阴性对照组相比,2个KGF活性短肽能够促进表皮细胞增殖,并呈浓度依赖性.RT-PCR和Western-blot检测结果显示,2个KGF活性短肽组中表皮细胞表达KGFR增强.结论 从噬菌体随机7肽库中筛选到2个KGF的关键序列,合成的2个KGF活性短肽能够与KGFR相结合,并增强KGFR的表达,从而促进表皮细胞增殖,有望应用于促进创面愈合.