一种新型醛酮还原酶的克隆表达、性质研究以及在不对称合成（R）CHBE中的应用

• 作者: 严明 张瑾成 许琳 魏淼
• 来源期刊: 生物加工过程
• 学科: 生物学
• 关键词: 醛酮还原酶 NADPH再生 蛋白纯化 酶学性质 (R)4氯3羟基丁酸乙酯
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 研究与开发
• 页码范围: 33-40
• 页数: 8页
• 分类号: Q815
• 字数: 5630字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3678.2016.02.007

摘要

为开发催化4氯乙酰乙酸乙酯（ COBE）制备（ R）4氯3羟基丁酸乙酯（（ R） CHBE）的新型催化剂，挖掘到了来自白色念珠菌SC5314中的一种NADPH辅酶依赖型醛酮还原酶CAK基因（ cak），并将该基因在大肠杆菌中表达。将重组酶进行纯化后，测定其酶学性质，并构建了以葡萄糖为辅底物的双酶偶联辅酶再生系统，考察其不对称转化制备（ R） CHBE的能力。结果表明：CAK对多种醛酮类化合物有催化活性，其催化COBE的最适反应温度为40℃，最适pH为5。 CAK在40℃下以及酸性条件中能保持较好的稳定性。 Mg2＋、Na＋、K＋对酶活有一定的激活作用，而Cu2＋存在条件下酶会彻底失活。乙酸乙酯、邻苯二甲酸二丁酯对酶活的抑制作用较小。利用双酶偶联辅酶再生系统不对称转化制备（ R） CHBE。在合适的条件下，转化600 mmol／L的底物，产率达80?6％，产物对映体过量值（ e?e．值）＞99％。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	严明	南京工业大学生物与制药工程学院	56	226	9.0	11.0
2	许琳	南京工业大学生物与制药工程学院	60	216	8.0	10.0
3	魏淼	南京工业大学生物与制药工程学院	4	3	1.0	1.0
4	张瑾成	南京工业大学生物与制药工程学院	1	0	0.0	0.0