2型猪链球菌SsU05-0474的表达纯化及单克隆抗体制备

• 作者: 刘思国 张跃灵 杨宝玲 沈国顺 谢芳 陈福广
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 2型猪链球菌 SsMps基因 蛋白表达 蛋白纯化 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 页码范围: 25-30
• 页数: 6页
• 分类号: S852.61
• 字数: 3827字
• 语种: 中文

摘要

为了鉴定2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,Ss2)菌毛骨架蛋白SsU05-0474(本文中简称SsMps)在菌体中的位置和存在形式,本研究以2型猪链球菌05ZYH33菌株基因组作为模板,PCR扩增菌毛骨架蛋白基因SsU05-0474,将其克隆至表达载体pET22b,构建重组质粒pET22b/SsMps,转化至E.coli BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达SsMps蛋白,并通过亲和层析纯化.纯化的SsMps蛋白免疫BALB/c雌鼠,利用细胞融合筛选制备该重组蛋白的单克隆抗体.结果显示,SsMps蛋白在大肠杆菌中以可溶形式表达,分子质量大小为45 kDa.每升大肠杆菌培养物可获得SsMps重组蛋白约30 mg,纯度大于95%.获得了1株该重组蛋白的单克隆抗体1D9,抗体亚型为IgG1/κ.通过单抗1D9与05ZYH33菌体蛋白组分Western blot,发现该抗体能够特异识别SsMps,并定位出SsMps大部分存在于细胞壁蛋白成分中,呈不同聚体存在.本研究制备的SsMps纯化蛋白及其单克隆抗体为研究SsMps蛋白的功能提供了工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谢芳	中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室	35	182	7.0	12.0
2	刘思国	中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室	48	547	14.0	22.0
3	沈国顺	沈阳农业大学畜牧兽医学院	105	608	15.0	21.0
4	杨宝玲	沈阳农业大学畜牧兽医学院	2	3	1.0	1.0
5	陈福广	中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室	1	2	1.0	1.0
6	张跃灵	中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室	1	2	1.0	1.0