多重荧光定量RT-PCR检测高致病性H5N6禽流感病毒

• 作者: 孙海燕 崔大伟 杨先知 谢国良 车飞虎 陈瑜 马光华 高敏
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 甲型流感病毒 高致病性禽流感H5N6病毒 人细胞核糖核酸酶P基因 多重荧光定量RT-PCR
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 临床检验技术研究
• 页码范围: 81-84
• 页数: 4页
• 分类号: R373.1
• 字数: 3330字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13602/j.cnki.jcls.2016.02.01

摘要

目的 建立一种快速检测流感病毒A型(FluA)及高致病性禽流感(HPAI) H5N6病毒感染的荧光定量RT-PCR法.方法 以人细胞核糖核酸酶P(RP)基因作为临床样本的内参基因,用Primer Express 3.0软件设计PCR特异性引物和探针,建立一种检测FluA及HPAI-H5N6病毒的一步法多重荧光定量RT-PCR方法,评估其灵敏度、特异性,并与上海之江公司提供的试剂及测序法进行比较.结果 建立的多重荧光定量RT-PCR法检测Flu A、H5、N6及RP质粒标准品的灵敏度均达102copies/mL.各对引物和相应探针仅检测出相应的病毒,在这些病毒和常见病原分析中未发现存在交叉反应,特异性达100％.用该法检测135例临床标本,结果显示FluA为23例,未发现HPAI-H5N6病毒的感染者;与上海之江公司提供的试剂的检测结果及基因测序结果一致.结论 建立的一步法多重荧光定量RT-PCR法可用于FluA及HPAI-H5N6病毒感染患者的早期诊断.