人SNCG基因shRNA慢病毒载体质粒的构建及鉴定

• 作者: 孙丹 徐红 李文怡 范余娟 范江涛
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: SNCG基因 短发夹干扰RNA 慢病毒载体质粒 子宫内膜癌 基因沉默
• 年，卷（期）: 2016,（26）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 13-16
• 页数: 4页
• 分类号: R737.33|Q782
• 字数: 3220字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2016.26.004

摘要

目的：构建人SNCG基因短发夹干扰RNA（shRNA）慢病毒载体质粒，并观察用其转染后人子宫内膜癌HEC-1-A 和 Ishikawa 细胞 SNCG mRNA 和蛋白的表达变化。方法设计3种 SNCG 基因特异性 shRNA 序列 SNCG-KD1、SNCG-KD2、SNCG-KD3，用脂质体 Lipofectamine 2000在293T 细胞构建成慢病毒载体质粒。用 SNCG-KD1、SNCG-KD2、SNCG-KD3慢病毒载体质粒转染人子宫内膜癌 HEC-1-A 和 Ishikawa 细胞，用实时荧光定量 PCR 法检测SNCG mRNA，用 Western blot 法检测 SNCG 蛋白。结果利用 Age Ⅰ和 EcoR Ⅰ双酶切连接转化后的3组阳性转化子，1％琼脂糖凝胶电泳，特异条带与预计结果相符。Chromas Lite 比对分析基因测序结果，鉴定结果与 GenBank 数据库一致，表明合成的3对 SNCG shRNA 序列 SNCG-KD1、SNCG-KD2、SNCG-KD3插入正确。HEC-1-A 和 Ishikawa细胞转染 SNCG-KD1、SNCG-KD2、SNCG-KD3慢病毒载体质粒后 SNCG mRNA 和蛋白的表达均显著降低（P 均＜0．05）。结论成功构建了3种 SNCG shRNA 慢病毒载体质粒，用其转染 HEC-1-A 和 Ishikawa 细胞后可有效沉默SNCG 基因表达。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	范余娟		28	94	6.0	7.0
2	徐红		99	485	11.0	17.0
3	范江涛		44	315	8.0	17.0
4	李文怡		2	6	2.0	2.0
5	孙丹		6	23	4.0	4.0