原钙黏蛋白7b与绿色荧光蛋白融合基因表达载体的构建及其在MCF10A细胞中的表达定位

• 作者: 刘真真 孙强 张峥嵘 李世崇 梁剑青 王启伟 袁龙 闫敏 陈昂
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 原钙黏蛋白7 基因克隆 亚细胞定位
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 322-325
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 2452字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2016.03.005

摘要

目的:构建原钙黏蛋白7b(PCDH7b)与绿色荧光蛋白(GFP)的融合基因表达载体pQCXIP-PCDH7b-EGFP,并检测PCDH7b-GFP融合蛋白在细胞中的表达定位.方法:以MDA-MB-436细胞基因组DNA为模板,PCR扩增人PCDH7b基因,克隆入逆转录病毒载体pQCXIP-EGFP-N1构建pQCXIP-PCDH7b-EGFP,病毒包装后感染人乳腺上皮细胞系MCF10A,免疫荧光染色检测其与膜蛋白E钙黏蛋白的相对表达定位.结果:构建获得逆转录病毒载体pQCXIP-PCDH7b-EGFP,融合蛋白PCDH7b-GFP定位于细胞浆和细胞膜,与E钙黏蛋白有共定位.结论:PCDH7b-GFP融合蛋白的表达,为后续活细胞成像分析PCDH7b在细胞内的动态分布奠定了基础.