半滑舌鳎RasGRP3基因的克隆和免疫应答分析

• 作者: 于孟君 孙璐明 杨光 沙珍霞 陈亚东 陈学杰
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 半滑舌鳎 RasGRP3 基因克隆 病源感染 基因表达
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 813-822
• 页数: 10页
• 分类号: S917
• 字数: 6262字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1118.2016.15363

摘要

RasGRP3(Ras Guanyl nucleotide Releasing Protein 3)是一种鸟苷酸交换蛋白,差异表达的RasGRP3蛋白在疾病发生和固有免疫中发挥着重要作用。为了探究半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)RasGRP3基因组成、组织表达及免疫应答特征,根据本实验室半滑舌鳎转录组数据获得的部分RasGRP3序列,采用RACE (Rapid-Amplification of cDNA Ends)技术,克隆了RasGRP3基因的全长,将测序结果进行氨基酸序列比对和同源性分析：半滑舌鳎RasGRP3基因全长2756 bp, ORF (Open Reading Frame)长度为2244 bp,编码747个氨基酸；推导的半滑舌鳎RasGRP3氨基酸序列与其他鱼类的RasGRP3氨基酸序列相似性较高,是同源基因。采用qRT-PCR (Quantitative Real-Time PCR)方法对RasGRP3基因在健康半滑舌鳎13种组织、鳗弧菌(Vibro anguillarum)感染后不同时间点的6种免疫组织及LPS、PGN、WGP和poly I：C 4种病原模拟物处理的半滑舌鳎外周血淋巴细胞不同时间点中的表达特征进行分析： RasGRP3基因在健康半滑舌鳎13种组织中均有表达,其中在性腺中表达量最高,其次是肝、脑和脾,在血液中表达量最低；RasGRP3基因在鳗弧菌感染后半滑舌鳎6种免疫组织中都表现出不同的表达趋势,其中肝和鳃中上调趋势明显,6 h比0 h上调表达倍数分别为3倍和30倍,在肠、脾、头肾和血液中6 h都出现了下调表达；RasGRP3在4种病原模拟物处理的半滑舌鳎外周血淋巴细胞中整体上调表达,在PGN和poly I：C这2种病原模拟物刺激后表达趋势出现明显上调,在PGN刺激后24 h比0 h上调表达倍数为13倍,在poly I：C刺激后6 h比0 h上调表达8倍。结果表明, RasGRP3基因参与了半滑舌鳎的免疫应答过程,可能在免疫调控中发挥着重要的作用。