转化生长因子-β1和丹参酮Ⅱ A联合诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞的分化

• 作者: 刘博 刘源 吕洋 孙微 李柔 王海萍 陈晓依
• 来源期刊: 解剖学报
• 学科: 医学
• 关键词: 骨髓间充质干细胞 转化生长因子-β1 丹参酮Ⅱ A 心肌细胞 流式细胞术 免疫组织化学 实时定量聚合酶链反应 大鼠
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 细胞和分子生物学
• 页码范围: 620-627
• 分类号: R329.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.16098/j.issn.0529-1356.2016.05.007

摘要

目的 探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)与丹参酮Ⅱ A(tanshinone Ⅱ A)联合诱导对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)定向分化为心肌样细胞的影响.方法 采用全骨髓贴壁法从10只SD大鼠四肢骨中分离、培养BMSCs,流式细胞术对培养的细胞进行鉴定.对第2代BMSCs作定向诱导,根据加入诱导剂的不同分为TGF-β1组、tanshinone Ⅱ A组、两者联合诱导组及实验对照组(不加任何诱导剂).诱导72h后更换为常规培养基继续培养,相差显微镜观察培养细胞的形态学变化;各组培养4周后,应用免疫细胞化学染色法检测原肌球蛋白(TPM)、缝隙连接蛋白43(Cx43)以及心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)的表达情况;实时定量PCR(Real-time PCR)法检测各组BMSCs在诱导培养的第1、2、4周心肌早期转录因子GATA-4、Nkx2.5的表达情况;透射电子显微镜观察分化细胞的超微结构变化.结果 实验对照组细胞TPM、Cx43及cTnⅠ均为弱阳性或阴性表达.与实验对照组相比,TGF-β1组、Tanshinone Ⅱ A组及两者联合诱导组BMSCs以上各标记物的阳性表达均明显升高,差异均具有统计学意义(均P＜0.05).其中,两者联合诱导组各标记物的阳性表达均显著高于TGF-β1及TanshinoneⅡA单独诱导组.Real-time PCR结果显示,在诱导第1周时TGF-β1组、Tanshinone Ⅱ A组及两者联合诱导组GATA-4及Nkx2.5基因表达均最强,随后表达减弱至不表达.1周时,联合诱导组GATA-4 mRNA相对表达量是实验对照组的3.7倍,Nkx2.5 mRNA相对表达量是实验对照组的2.9倍,差异均具有统计学意义(均P＜0.05).透射电子显微镜结果显示,各诱导组均可见分化的细胞呈杆状,胞核卵圆形,位于细胞中央,胞质中可见平行排列的肌丝、粗面内质网和线粒体等细胞器.结论 TGF-β1、tanshinone Ⅱ A均可分别及联合诱导BMSCs获得心肌分化表型,且两者联合诱导效果优于单一诱导.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王海萍	河北北方学院组织学与胚胎学教研室	35	126	6.0	9.0
2	吕洋	河北北方学院组织学与胚胎学教研室	53	206	8.0	10.0
3	刘博	河北北方学院附属第一医院病理科	55	164	7.0	9.0
4	孙微	河北北方学院组织学与胚胎学教研室	9	23	3.0	4.0
5	李柔	河北北方学院组织学与胚胎学教研室	9	17	2.0	3.0
6	陈晓依	河北北方学院组织学与胚胎学教研室	8	16	2.0	3.0
7	刘源	河北北方学院组织学与胚胎学教研室	4	15	2.0	3.0