CCN1 siRNA对视网膜血管内皮细胞活性的抑制及其机制

• 作者: 底煜 张轶欧 王爱媛 陈晓隆
• 来源期刊: 中华实验眼科杂志
• 关键词: 富含半胱氨酸蛋白61/生理 视网膜新生血管/预防及控制 早产儿视网膜病变/治疗 缺氧 RNA干扰 血管内皮生长因子 恒河猴脉络膜-视网膜内皮细胞
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 24-29
• 页数: 6页
• 字数: 4901字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2016.01.005

摘要

背景 富含半胱氨酸蛋白61(Cyr61)/CCN1在早产儿视网膜病变(ROP)的视网膜新生血管(RNV)形成中发挥重要作用,但目前国内外关于CCN1小于扰RNA(CCN1 siRNA)对ROP有无延缓和治疗作用的研究较少.目的 探讨特异性抑制CCN1的表达对视网膜血管内皮细胞的调控作用.方法 恒河猴脉络膜-视网膜内皮细胞株(RF/6A)分别于常氧(正常对照组)和低氧环境(体积分数1％O2、5％ CO2和94％N2的混合气体)中培养,低氧环境培养的细胞分别采用脂质体LipofectamineTM 2000介导转染空载体质粒(低氧对照组)和CCN1 siRNA表达质粒(CCN1 siRNA转染组),于细胞转染后24 h采用逆转录PCR法检测细胞中CCN1siRNA重组质粒的表达情况;分别于培养后0、24、48、72和96 h采用细胞计数试剂盒培(CCK-8)法测定各组细胞活性并绘制细胞生长曲线;于培养后24 h采用流式细胞术检测各组培养细胞的增生和凋亡情况;于培养后24 h采用免疫荧光技术和Western blot法检测各组RF/6A细胞中CCN1和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达.结果 细胞转染后24 h用逆转录法检测到细胞中CCN1 siRNA的表达条带.CCK-8检测显示随着培养时间的延长,RF/6A细胞增生值(吸光度,A值)均明显增加,但CCN1 siRNA转染组各时间点细胞增生值均明显低于正常对照组和低氧对照组,总体比较差异均有统计学意义(F组别=198.45,P＜0.05;F时间=39.26,P＜0.05);CCN1 siRNA转染组、正常对照组和低氧对照组细胞的凋亡率分别为(68.9±1.1)％、(18.9±1.3)％和(39.6±1.8)％,其中CCN1 siRNA转染组细胞的凋亡率明显高于正常对照组和低氧对照组,差异均有统计学意义(t=2.93、2.56,均P＜0.05);CCN1和VEGF蛋白在正常对照组细胞中呈弱表达,在低氧对照组细胞中表达均明显增强,CCN1 siRNA转染组细胞中CCN1和VEGF的相对表达量较低氧对照组均明显下降(均P＜0.05).结论 CCN1 siRNA转染后能抑制RF/6A细胞的增生并促进其凋亡,CCN1 siRNA可下调缺氧环境下RF/6A细胞中CCN1和VEGF蛋白的表达水平,可能是抑制RNV形成的主要机制.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	底煜	中国医科大学附属盛京医院眼科	46	168	7.0	9.0
2	陈晓隆	中国医科大学附属盛京医院眼科	150	615	12.0	15.0
3	张轶欧	中国医科大学人事处	12	39	3.0	6.0
4	王爱媛	中国医科大学附属盛京医院眼科	23	95	6.0	8.0