米黑根毛霉脂肪酶在毕赤酵母中的高效表达及酶学性质研究

• 作者: 何东 吕鹏梅 李惠文 杨玲梅 王治元 罗文 苗长林 袁振宏
• 来源期刊: 林产化学与工业
• 学科: 工学
• 关键词: 米黑根毛霉脂肪酶 毕赤酵母 密码子优化 酶学性质
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 135-140
• 页数: 6页
• 分类号: TQ35|Q78
• 字数: 4058字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-2417.2016.01.019

摘要

根据毕赤酵母( Pichia pastoris)密码子使用偏爱性,对米黑根毛霉脂肪酶( RML)成熟肽基因进行全面密码子优化,以提高RML基因在酵母细胞中表达的水平,并对重组脂肪酶的酶学性质进行了研究。运用重叠延伸 PCR 合成优化后的 RML 成熟肽基因,并进一步构建毕赤酵母表达载体pPIC9K-RML,通过电击法转化毕赤酵母GS115菌株,经G418抗性和PCR筛选获得高拷贝转化重组子。重组酵母菌用0.5%甲醇诱导异源基因表达,在28℃摇瓶培养168 h后酶活力达到122 U/mL,较未优化的原始菌株的表达酶活提高了10倍。重组脂肪酶最适温度为45℃,最适pH值为7,甲醇体积分数为40%以下时重组RML具有较好的稳定性。