星状病毒核酸检测标准物质的研制

• 作者: 付溥博 刘莉 张西萌 徐蕾蕊 李丹 林长军 汪琦 马丹 魏海燕
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 医学
• 关键词: 星状病毒 核酸 定量实时聚合酶链式反应 数字聚合酶链式反应 标准物质
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 安全检测
• 页码范围: 172-177
• 页数: 6页
• 分类号: R155.5
• 字数: 5166字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201606031

摘要

目的:研制用于食品中星状病毒核酸检测的cRNA标准物质.方法:利用基因克隆体外转录方法制备星状病毒cRNA纯品,初步定量后稀释至适宜浓度进行分装,其中一部分分装样品添加RNAsafe处理,剩余部分不做处理,制备2种标准物质样品.采用实时荧光定量实时聚合酶链式反应(real-time-polymerase chain reaction,RT-PCR)方法检验2种标准物质样品均匀性和稳定性.样品中RNA浓度(拷贝/μL)通过荧光定量RT-PCR和数字PCR联合定值获得,并进行不确定度分析.结果:均匀性结果显示2种样品组间精密度与组内精密度差异均无统计学意义(P＞0.05).稳定性检验表明20～25℃10d、4℃14d、-20℃3个月及-80℃和液氮6个月2种样品cRNA含量无显著变化.RNAsafe(-)标准物质定值为:(1.652±0.143)×108拷贝/μL(-80℃)和(1.652±0.135)×108拷贝/μL(液氮).结论:RNAsafe(-)标准物质样品可作为用于星状病毒核酸检测的标准物质.