使用交联剂DMP消除免疫沉淀非特异性条带

• 作者: 刘建社 刘裕禄 姜华军 张敏 张春 熊敏
• 来源期刊: 华中科技大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 免疫沉淀 蛋白质相互作用 蛋白质磷酸化
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 27-32
• 页数: 6页
• 分类号: R392
• 字数: 5427字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-0741.2016.01.006

摘要

目的 消除免疫沉淀技术中免疫印迹检测到的非特异性条带,排除非特异性条带对研究蛋白质分子相互作用及磷酸化的干扰.方法 检测蛋白交联剂庚二亚氨酸二甲酯(DMP)交联抗体和载体基质的稳定性及交联效果;积极寻找和优化抗原析出条件,分离出免疫沉淀复合物中抗原成分;检测析出抗原特异性条带及磷酸化水平.结果 DMP有效地将抗体共价结合于载体基质,具有较好的稳定性和交联效果,其免疫沉淀中未检测到非特异性蛋白条带;与Laemmli缓冲液相比,甘氨酸可有效地一次性析出免疫沉淀中大部分抗原;经pH值调整后,析出抗原的浓度及磷酸化水平无明显变化.结论 交联剂DMP能有效地消除传统免疫沉淀技术中检测到的非特异性蛋白条带,且能应用于蛋白质磷酸化的检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张春	华中科技大学同济医学院附属协和医院肾内科	51	265	10.0	12.0
2	姜华军	华中科技大学同济医学院附属协和医院肾内科	20	100	6.0	9.0
3	刘建社	华中科技大学同济医学院附属协和医院肾内科	77	346	10.0	16.0
4	张敏	华中科技大学同济医学院附属荆州医院肾内科	197	1492	20.0	32.0
5	熊敏	华中科技大学同济医学院附属协和医院肾内科	18	94	7.0	9.0
6	刘裕禄	华中科技大学同济医学院附属协和医院肾内科	1	1	1.0	1.0