茶树咖啡碱合成酶 CRISPR/Cas9基因组编辑载体的构建

• 作者: 刘丽萍 刘仲华 刘硕谦 唐雨薇 王若娴 陈宇宏
• 来源期刊: 茶叶科学
• 学科: 工学
• 关键词: 茶树 基因组编辑技术 咖啡碱合成酶 CRISPR/Cas9 技术
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 页码范围: 414-426
• 页数: 13页
• 分类号: TS272|Q52
• 字数: 7139字
• 语种: 中文

摘要

CRISPR/Cas9技术是一门新兴的基因组定点编辑技术，具有操作简单、高效的优点，可轻松实现对目标基因的敲除、替换和定点突变等操作。该技术刚诞生，就受到了全球生命科学领域研究者的关注，不到3年的时间就已经成功应用于多种动、植物当中。然而 CRISPR/Cas9技术在茶树中的应用面临载体构建问题，本文以茶树咖啡碱合成酶为例，联合采用常规 PCR、Overlapping PCR 和 Golden Gate Cloning 技术，构建了包含茶树咖啡碱合成酶双靶点的 CRISPR/Cas9基因编辑载体，为 CRISPR/Cas9介导的基因组编辑技术在茶树中的应用奠定了坚实基础。