鲤鱼2种脂蛋白脂肪酶基因的cDNA克隆、表达及其酶活性

• 作者: 于凡 俞菊华 周杰 唐永凯 李建林 李红霞
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鲤鱼 脂蛋白脂肪酶 基因克隆 原核表达 酶活性
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医?水产养殖
• 页码范围: 414-423
• 页数: 10页
• 分类号: S965.116
• 字数: 7495字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2016.02.027

摘要

为了对鲤鱼（Cyprinus carpio）2种脂蛋白脂肪酶（LPL1、LPL2）基因进行cDNA克隆以及表达和酶活性分析，测定了鲤鱼2种脂蛋白脂肪酶基因的组织表达特征，对这2种基因进行了原核表达，采用对硝基苯酚法比较了2种LPL的酶活性。克隆结果表明，鲤鱼LPL1和LPL2基因的开放阅读框分别为1524 bp和1503 bp，分别编码507个和500个氨基酸，氨基酸相似性为45?51％，LPL2氨基酸功能位点由83 N突变至83 K。实时荧光定量PCR结果表明：LPL1和LPL2均在肝脏中表达量最高，其次在心脏、脂肪、肌肉、脑、肾中，前肠表达量最低，在所有组织（器官）中LPL1的表达量比LPL2高。构建的原核表达载体LPLs?pEASY（ E2），经IPTG诱导，在Transetta（ DE3）细胞中表达了分子量分别为5．55×104、5．35×104的融合蛋白LPL1和LPL2。酶活性测定结果表明：LPL1和LPL2酶活性最适温度均为为35℃，最适pH均为8?0。 LPL1酶活性高于LPL2，推测可能与LPL2的83 N位点突变所导致的N?糖基化位点缺失有关。?