HBVC 区基因真核表达载体的构建及转染

• 作者: 刘金辉 周艳 夏方娜 邹淑慧
• 来源期刊: 南昌大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 乙型肝炎病毒 真核表达载体 重组载体 乙型肝炎 e 抗原
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 【基础医学】
• 页码范围: 36-40
• 页数: 5页
• 分类号: R373.2|Q78
• 字数: 3671字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13764/j.cnki.ncdm.2016.01.008

摘要

目的：构建含乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）增强子Ⅱ（enhancerⅡ，EnhⅡ）、核心启动子区（basal core promoter，BCP）和 C 区基因的真核表达载体，以研究 EnhⅡ、BCP 和 C 区基因的生物功能。方法提取 HBV DNA，PCR 法扩增 EnhⅡ-BCP-C 区基因片段；HindⅢ和 XbaⅠ双酶切 PCR 产物，胶回收纯化的 DNA 片段，连接入载体 pBudCE4．1，酶切及 DNA 测序鉴定重组载体。采用脂质体介导的方法将重组载体 DNA 转染 HepG2细胞和HeLa 细胞，酶联免疫吸附试验检测重组载体转染的 HepG2细胞、HeLa 细胞上清液及细胞裂解物中乙型肝炎 e 抗原（hepatitis B e antigen，HBeAg）的表达水平。结果双酶切及 DNA 测序鉴定，含840 bp HBV EnhⅡ-BCP-C 区基因片段的重组载体构建成功。EnhⅡ＋BCP＋C／pBudCE4．1重组载体转染 HepG2细胞24、48 h 后的上清液和转染48 h 后裂解物中 HBeAg 表达水平均明显高于 pBudCE4．1空载体转染 HepG2细胞（均 P＜0．05），EnhⅡ＋BCP＋C／pBudCE4．1重组载体转染 HeLa 细胞24、48 h 后的上清液和转染48 h 后的裂解物中 HBeAg 表达水平与pBudCE4．1空载体转染 HeLa 细胞比较差异均无统计学意义（均P＞0．05）。结论成功构建 HBV EnhⅡ-BCP 启动-C 基因肝细胞特异表达的真核载体，有利于进一步研究 EnhⅡ、BCP 和 C 区基因某些突变位点的生物学意义。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘金辉	南昌大学基础医学院微生物学教研室	47	131	7.0	9.0
2	夏方娜	南昌大学基础医学院微生物学教研室	7	7	2.0	2.0
3	邹淑慧	南昌大学基础医学院微生物学教研室	18	6	1.0	2.0
5	周艳	江西省儿童医院检验科	10	14	3.0	3.0