牛MYOZ2基因启动子克隆及活性分析

• 作者: 吴森 张亚冉 昝林森 李世军 李安宁 段美艳 王明明 王晓宇 赵志东
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牛 肌原调节蛋白2基因启动子 基因克隆 活性分析 5'RACE
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 652-660
• 页数: 9页
• 分类号: S823.8|S813.3
• 字数: 5577字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2016.04.003

摘要

旨在克隆测定牛肌原调节蛋白2基因(Myozenin2,MYOZ2)启动子的全长序列,进行活性区域分析,为牛MYOZ2基因功能和表达调控机理研究提供理论依据.通过5 'RACE方法确定牛MYOZ2基因转录起始位点;采用PCR技术,以牛基因组为模板克隆MYOZ2基因启动子序列.利用在线软件分析启动子区域中可能包含的转录因子结合位点.依据分析结果重新设计引物,构建7个包含不同缺失片段的双荧光素酶报告基因载体,转染C2C12细胞系,利用双荧光素酶系统检测不同片段的启动子活性.结果表明,克隆得到牛MYOZ2基因启动子序列2 065 bp,确定MYOZ2基因的转录起始位点;MYOZ2基因片段-84/+125荧光素酶相对活性极显著高于空载体pGL3-Basic(P＜0.01),MYOZ2基因片段-683/+125荧光素酶相对活性极显著高于基因片段-263/+125(P＜0.01).MYOZ2基因启动子核心区域位于-84/+125 bp,而且MEF2,SRF,MyoD,YY1等转录因子可能参与MYOZ2基因的转录调控.