利用锁核酸化学偶联FokⅠ核酸酶靶向切割HBV基因的体外实验

• 作者: 卢大儒 朱化星 李威 陈红岩 马丽
• 来源期刊: 遗传
• 关键词: 乙肝病毒 基因编辑 锁核酸 FokⅠ 化学偶联
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 350-359
• 页数: 10页
• 字数: 7329字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16288/j.yczz.15-435

摘要

乙肝病毒(HBV)是有缺口的双链DNA病毒,侵入人体肝细胞后形成共价闭合环状DNA(cccDNA)持续复制,并在逆转录过程中随机整合入宿主基因组.慢性乙型肝炎感染者平均每个细胞中含有33个cccDNA拷贝,半衰期长达35～57 d,很难从体内彻底清除.利用锁核酸抑制HBV转录,是乙肝治疗的新策略.此外,利用基因组编辑技术靶向切割HBV基因组,有望从源头治愈乙型肝炎.基于锁核酸与双链DNA形成三股螺旋的能力、抵御核酸酶及聚合酶的稳定性以及对单碱基错配的敏感性,本研究以靶向切割乙型肝炎病毒为例,设计构建锁核酸修饰的寡核苷酸作为DNA结合域,有效增强对靶基因的特异性识别;同时利用FokⅠ核酸酶分子量小、二聚化时才具有酶活等特点,设计构建FokⅠ切割域二聚体重组蛋白作为DNA切割域;进而通过双功能交联剂GMBS,建立了5'端氨基(-NH2)修饰的锁核酸与N端巯基(-SH)修饰的FokⅠ核酸酶定向化学偶联的方法,并在体外验证了新型工具对HBV基因的靶向切割.该方法为此后在体内进行高特异性、无整合风险的抗病毒基因治疗提供了全新的技术思路.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卢大儒	复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室	137	982	17.0	25.0
2	陈红岩	复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室	17	37	4.0	5.0
3	朱化星		2	8	2.0	2.0
4	马丽	复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室	8	102	5.0	8.0