戊型肝炎病毒ORF3和标签His融合真核表达载体的构建与表达

• 作者: 于浩 张丹 荣义辉
• 来源期刊: 实用肝脏病杂志
• 关键词: 戊型肝炎病毒 真核表达 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 病毒性肝炎
• 页码范围: 164-167
• 页数: 4页
• 字数: 3515字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-5069.2016.02.010

摘要

目的 体外构建HEV ORF3蛋白融合His标签的真核表达载体及其初步鉴定和蛋白表达.方法 从1例男性31岁戊型肝炎患者血清中分离HEV RNA,逆转录合成eDNA,特异性引物扩增HEV ORF3片段,将其定向连接到pcDNA3.1(-)-His真核表达载体中,经抗生素筛选后,酶切及测序鉴定其序列正确性.采用提取质粒转染HepG2细胞,培养96 h后裂解细胞,采用抗His-Tag抗体进行Western blot检测目的蛋白.结果 从戊型肝炎患者血清中成功分离出Ⅰ型HEV RNA,经抗生素筛选、酶切鉴定和测序确认pcDNA3.1(-)-HEF3-His真核表达载体构建成功,转染HepG2细胞,经Western blot检测显示15 kDa位置有明显融合蛋白条带.结论 成功构建了HEV ORF3与His标签融合的真核表达载体,体外转染HepG2细胞后鉴定其工作良好,为后续HEV ORF3蛋白的研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张丹		17	6	1.0	2.0
2	于浩		3	1	1.0	1.0
3	荣义辉	辽宁省解放军第302医院肝衰竭诊疗与研究中心	1	1	1.0	1.0