粉尘螨过敏原Derf13基因克隆表达与免疫原性鉴定

• 作者: 刘志刚 刘晓宇 巴金戈 林建立 王媛媛 黄娜娜
• 来源期刊: 南昌大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 粉尘螨 过敏原 Derf 13 蛋白表达 纯化 免疫原性
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 【基础医学】
• 页码范围: 21-25
• 页数: 5页
• 分类号: R392.8
• 字数: 3572字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13764/j.cnki.ncdm.2016.01.005

摘要

目的：克隆表达粉尘螨过敏原 Der f 13，并鉴定其免疫原性。方法提取粉尘螨总 RNA，通过 RT-PCR 获得 Der f 13的 cDNA 片段。根据已知 Der f 13序列设计出表达引物，再通过已获得的 cDNA 和引物进行 PCR 扩增，将扩增产物连接到 T 载体上并转入克隆菌 Top 10中，涂板、培养，挑选阳性菌落，LB／AMP 培养送测序。将测序正确的基因转入表达载体 PET32中，经酶切鉴定测序再转入表达菌 BL21中，表达 Derf 13蛋白，纯化、鉴定所得蛋白，并通过 Western-blot 等方法检测其免疫学活性。结果RT-PCR 结果显示，Der f 13基因片段大小为410 bp；同源性分析表明：本实验所克隆的 Der f 13基因与 NCBI 数据库的 Der f 13基因的同源性为95％；SDS-PAGE 结果显示，重组质粒 PET32-Der f 13在 BL21（DE3）中高效表达，重组蛋白分子质量为35 ku，表达后的重组蛋白主要以可溶性蛋白形式存在，经与尘螨过敏患者血清反应，检测出重组蛋白有较强免疫学活性。结论克隆出 Der f 13基因，表达和纯化出目的蛋白，并具有免疫原性，为过敏性疾病的诊断和免疫治疗奠定理论基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘志刚	深圳大学医学院过敏反应与免疫学研究所	324	1724	17.0	23.0
2	刘晓宇	深圳大学医学院过敏反应与免疫学研究所	42	160	7.0	11.0
3	王媛媛	深圳大学医学院过敏反应与免疫学研究所	4	10	1.0	3.0
4	林建立	深圳大学医学院过敏反应与免疫学研究所	4	3	1.0	1.0
5	黄娜娜	深圳大学医学院过敏反应与免疫学研究所	1	0	0.0	0.0
6	巴金戈	深圳大学医学院过敏反应与免疫学研究所	2	0	0.0	0.0