转录因子激活蛋白-2α重组质粒的构建及其对肾透明细胞癌细胞增殖能力的影响

• 作者: 姚远新 孟庆禹 张旭 张瑜 武翀 罗国雄 赵超飞 马明辉 马鑫
• 来源期刊: 解放军医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 转录因子激活蛋白-2α 质粒 肾透明细胞癌 增殖
• 年，卷（期）: 2016,（7）
• 所属期刊栏目: 基础研究论著
• 页码范围: 773-778
• 页数: 6页
• 分类号: R737.11
• 字数: 3836字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-5227.2016.07.028

摘要

目的 构建转录因子激活蛋白-2α(transcription factor AP-2 alpha,TFAP2α)重组真核质粒及其稳转细胞株,研究过表达TFAP2α对肾透明细胞癌细胞增殖能力的影响.方法 采用反转录PCR方法从293T细胞全基因组DNA中扩增TFAP2α基因编码序列,运用质粒酶切、连接及转化构建重组真核质粒pLV-EGFP(2A)Puro-TFAP2α,测序鉴定.利用慢病毒包装系统将重组质粒转染人293T细胞,制备病毒悬液转染质粒入肾透明细胞癌细胞系786-O和Caki-2中,嘌呤霉素加压筛选,形成稳定转染细胞株后扩大培养,并通过实时定量PCR法和Western Blot法检测转染细胞中TFAP2α的mRNA和蛋白的表达.通过MTS实验、平板克隆实验和细胞周期检测,观察未转染质粒组、转染空载体组和转染重组质粒组细胞增殖和周期的变化.结果 成功构建重组真核质粒pLV-EGFP(2A)Puro-TFAP2α和稳定转染过表达TFAP2α的786-O和Caki-2细胞株.重组质粒组TFAP2αmRNA表达水平和蛋白表达水平均明显高于未转染组和空载体组(P＜0.05).MTS实验中,重组质粒组490 nm处光吸收值较未转染组和空载体组显著降低(P＜0.05).平板克隆实验中,重组质粒组的平板克隆率较未转染组和空载体组亦显著降低(P＜0.05).与未转染组和空载体组比较,重组质粒组G0/G1期细胞比例显著升高(P＜0.05),S期细胞比例显著降低(P＜0.05),G2/M期细胞比例无统计学差异(P＞ 0.970).结论 过表达TFAP2α能明显降低肾透明细胞癌细胞系786-O和Caki-2细胞增殖能力,影响细胞周期变化,停留在G0/G1期的细胞明显增加,而S期的细胞明显减少,使其发生G1/S期阻滞从而抑制细胞增殖.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张旭	解放军总医院泌尿外科	194	947	14.0	21.0
2	马鑫	解放军总医院泌尿外科	75	259	9.0	13.0
3	张瑜	解放军总医院泌尿外科	11	19	2.0	4.0
4	孟庆禹	解放军总医院泌尿外科	3	3	1.0	1.0
5	赵超飞	解放军总医院泌尿外科	4	9	2.0	3.0
6	姚远新	解放军总医院泌尿外科	4	9	2.0	3.0
7	罗国雄	解放军总医院泌尿外科	4	9	2.0	3.0
8	马明辉	解放军总医院泌尿外科	3	2	1.0	1.0
9	武翀	解放军总医院泌尿外科	3	8	2.0	2.0