NF-κB荧光素酶报告基因系统的构建及验证

• 作者: 刘长振 孙震晓 李晶哲 车路阳 郭志兰
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: NF-κB 荧光素酶NanoLuc 报告基因系统
• 年，卷（期）: 2016,（10）
• 所属期刊栏目: 生物技术与方法
• 页码范围: 1465-1473
• 语种: 中文
• DOI: 10.13345/j.cjb.160185

摘要

为了定量检测NF-κB的活化效果及筛选与NF-κB活化调控相关的药物,通过去除逆转录病毒载体pQCXIP原有的CMV启动子,并分别插入NF-κB增强子序列及荧光素酶NanoLuc报告基因序列,构建了一种新的含有NF-κB增强子序列和NanoLuc (NLuc)报告基因序列的表达载体,并进一步建立受NF-κB调控的稳定表达NLuc荧光素酶的细胞系.酶切鉴定及测序结果表明成功构建了重组质粒pQCXIP-NF-κB-NLuc;NF-κB信号通路的刺激物肿瘤坏死因子TNF-α作用于构建的稳定表达NLuc的细胞系后出现特异性的荧光素酶反应,且该酶反应与TNF-α的刺激呈良好的时间、剂量依赖性,该结果表明受NF-κB调控的稳定表达NLuc荧光素酶的细胞系构建成功.实例验证中,NF-κB抑制剂雷公藤甲素对此细胞系NLuc荧光素酶表达的抑制呈剂量效应.综上,本实验构建的受NF-κB调控的稳定表达NLuc荧光素酶的报告基因系统可用于NF-κB的活化效果的定量检测及筛选与NF-κB活化调控相关的药物,具有研究和应用价值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李晶哲	中国中医科学院医学实验中心北京市重点实验室	12	64	4.0	8.0
2	孙震晓	北京中医药大学中药学院	52	473	12.0	20.0
3	刘长振	中国中医科学院医学实验中心北京市重点实验室	7	20	3.0	4.0
4	郭志兰	北京中医药大学中药学院	3	10	2.0	3.0
8	车路阳	中国人民解放军总医院骨科	3	4	1.0	2.0