SH-SY5Y细胞中过表达RIPK3对ZFP36基因转录的影响

• 作者: 廖吉连 张国禄 张赛 徐忠伟 涂悦 程世翔 衣泰龙
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 神经母细胞瘤 细胞系,肿瘤 锌指 基因表达调控 血管内皮生长因子类 脑源性神经营养因子 肿瘤坏死因子类 受体相互作用蛋白激酶-3 锌指蛋白36 人脱帽酶2
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 细胞与分子生物学
• 页码范围: 418-421,422
• 页数: 5页
• 分类号: R34
• 语种: 中文
• DOI: 10.11958/20150166

摘要

目的：探讨SH-SY5Y细胞中受体相互作用蛋白激酶-3（RIPK3）下游信号通路及其中的关键信号分子的作用。方法通过质粒转染的方式在实验组SH-SY5Y细胞内表达外源性RIPK3蛋白，将转染空载质粒载体SH-SY5Y细胞作为对照组。通过观察质粒所携带的绿色荧光蛋白（GFP）在细胞中的表达情况以验证转染结果，Western blot对外源性RIPK3表达进行验证。MTT法检测细胞增殖活性，观察过表达RIPK3对细胞活性的影响，以确认其在细胞内是否具有生物活性。运用转录组测序技术（RNAseq）分别检测2组细胞内基因转录丰度并应用Ingenuity Pathway Analysis（IPA）数据库进行分析，获得RIPK3下游信号通路及关键分子。通过微滴式数字化PCR（ddPCR）对部分RNAseq结果进行验证。结果外源性RIPK3在细胞内具有生物活性，能够抑制SH-SY5Y细胞的增殖。RNAseq数据经IPA分析后得出锌指蛋白36（ZFP36）为RIPK3下游效应分子，其相关效应分子包括血管内皮生长因子（VEGF）、人脱帽酶2（DCP2）、脑源性神经营养因子（BDNF）、肿瘤坏死因子（TNF）的转录丰度也发生了相应的变化。结论 RIPK3能够参与对ZFP36以及与其相关效应分子的转录调控，进而在神经系统的发育、炎症和肿瘤发生等生理、病理过程中发挥重要作用。