人源抗狂犬病毒糖蛋白Ⅲ号表位链置换基因工程抗体研究

• 作者: 刘洋 孙丽娜 李川 李德新 梁米芳
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: 狂犬病毒 单链抗体 糖蛋白 表位
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 393-398
• 页数: 6页
• 分类号: R373.9
• 语种: 中文

摘要

为获得针对狂犬病毒糖蛋白Ⅲ号表位的人源单抗,本研究采用噬菌体展示平台,对一株狂犬病毒糖蛋白Ⅲ号抗原表位的人源单抗CR4098采用链置换法进行改造.以CR4098单链抗体为骨架,从狂犬疫苗接种者外周血分离淋巴细胞,提核酸逆转录,PCR扩增抗体轻链可变区基因,替换CR4098的轻链基因,构建轻链置换文库.经纯化狂犬病毒aG株富集筛选,以上述筛选出的轻链阳性克隆为骨架,构建重链置换抗体库,富集筛选后通过ELISA和IFA鉴定阳性抗体克隆并进行序列测定.利用IgG表达载体VH/VK双质粒系统瞬时转染293T细胞实现IgG抗体的分泌型表达,通过亲和力测定和中和试验鉴定IgG抗体功能.结果显示,通过轻链置换,我们获得14株抗狂犬病毒scFv抗体,通过ELISA、IFA、亲和力测定及中和试验确定人源抗体RV3A5特异性结合狂犬病毒糖蛋白,对狂犬病毒CVS株和aG株均具有良好的中和活性,亲和力达到2.8×10-9M.通过竞争ELISA对抗体结合表位进行鉴定,结果表明RV3A5特异性识别糖蛋白Ⅲ号抗原表位.通过链置换法成功获得1株全新的针对狂犬病毒糖蛋白Ⅲ号表位的高亲和力人源中和抗体,为狂犬病毒抗体制剂鸡尾酒治疗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梁米芳		52	102	5.0	8.0
2	李德新		67	367	7.0	18.0
3	孙丽娜		23	42	3.0	5.0
4	李川		38	55	4.0	6.0
5	刘洋		12	18	2.0	3.0