树鼩CD4蛋白多克隆抗体的制备及检测

• 作者: 严丽蔚 任芳芳 卢孔杰 吴忠香 巩蔚 张雪梅 徐婧雯 朱文兵 马娜
• 来源期刊: 实验动物与比较医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 树鼩 CD4蛋白 表达 纯化 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 243-249
• 页数: 7页
• 分类号: Q95-33
• 字数: 4308字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2016.04.001

摘要

目的 原核表达、纯化树鼩CD4蛋白并制备多克隆抗体,检测树鼩体内的CD4蛋白.方法 克隆树鼩CD4基因并连接到表达载体,构建重组质粒pET30a(+)-CD4和pGEX-5X-1-CD4,表达并纯化重组蛋白His-CD4和GST-CD4,用不同佐剂[弗氏佐剂、MF59和A1(OH)3]制备多抗,用Western blot法检测血清抗体特异性.结果 蛋白表达产物His-CD4和GST-CD4的相对分子质量分别约为53.5×103和70.0×103,纯化后蛋白浓度分别为600 μg/mL和1 mg/mL;三组佐剂均能诱导产生抗体,抗体几何平均滴度(Geometric Mean Titer,GMT)的比较结果为:弗氏佐剂组(GMT:97 420)＞Al(OH)3佐剂组(GMT:67 202)＞MF59佐剂组(GMT:55 128);其中弗氏佐剂组显著高于原蛋白组(P＜0.001);Al(OH)3组显著高于原蛋白组(P＜0.01);而MF59组显著高于原蛋白组(P＜0.05).结论 制备了特异性良好的小鼠抗血清,能够特异性地结合树鼩的CD4蛋白.为下一步本实验室制备CD4单克隆抗体、CD4蛋白分子的功能研究以及树鼩的病毒感染模型等免疫相关实验的进行提供了基础.