橡胶树乳管表达HbHMGR1基因双元表达载体构建与鉴定

• 作者: 刘洁琼 张春红 曾宪海 李哲 林位夫 贺永国 马晓晓 黄绵佳
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 橡胶树 乳管特异性启动子PHEV2.1 HbHMGR1基因 植物表达载体 构建 鉴定
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子生物学
• 页码范围: 163-168
• 页数: 6页
• 分类号: S794.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2016.02.163

摘要

[目的]克隆橡胶树乳管特异性强启动子HEV2.1(PHEV2.1),构建天然橡胶生物合成途径关键限速酶基因(HbHMGR1)的乳管特异性植物表达载体,为橡胶树遗传转化奠定基础.[方法]根据已报道的HEV2.1序列(GenBank登录号AY247789.1)设计1对特异引物,采用PCR从橡胶树热研7-33-97基因组DNA中克隆PHEV2.1,与HbHMGR1基因融合构建橡胶树乳管特异性植物表达载体,并以PCR和限制性内切酶酶切进行鉴定.[结果]用特异引物可从热研7-33-97基因组DNA中扩增获得1852bp的PHEV2.1片段,其与AY247789.1启动子序列的同源性为98.6％.将PHEV2.1与HbHMGR1基因融合构建乳管特异性植物表达载体pCAMBIA230 1-PHEV2.1-HbHMGR1,经PCR和限制性内切酶酶切鉴定证明植物表达载体构建成功.[结论]将PHEV2.1和HbHMGR1基因先构建到pCAMBIA3301载体上再克隆至pCAMBIA2301载体上,能有效解决直接克隆至pCAMBIA2301载体上出现PstⅠ突变、阻碍载体构建的难题,成功构建获得乳管特异性植物表达载体pCAMBIA2301-PHEV2.1-HbHMGR.