尼帕病毒与猪流感病毒双重荧光定量RT-PCR方法的建立

• 作者: 张俊哲 王乃福 王建华 王玉玲 肖妍 董志珍 赵祥平 陈小金 陈本龙
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 尼帕病毒 猪流感病毒 TaqMan-MGB探针 双重荧光定量RT-PCR
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 11-16
• 页数: 6页
• 分类号: S855.3
• 字数: 5433字
• 语种: 中文

摘要

根据尼帕病毒(NiV)M基因和猪流感病毒(SIV)M基因序列设计引物和Taq Man-MGB探针,通过优化反应条件建立了一种鉴别NiV和SIV的双重实时荧光定量RT-PCR检测方法,对该方法的定量线性范围、敏感性、重复性和特异性进行了评价及初步应用.结果显示,用该方法检测NiV M基因的RNA标准对照(NiV-M-RNA)和SIV M基因的RNA标准对照(SIV-M-RNA),定量线性范围分别为4.6×101copies/μL～4.6×108 copies/μL和5.8×101copies/μL～5.8×108 copies/μL,检出限分别为46个拷贝和58个拷贝.该方法的组内试验和组间试验的变异系数均小于1.6％,显示其良好的可重复性.该方法仅对NiV-M-RNA和SIV呈现特异性扩增曲线,不与猪瘟病毒(CSFV)、猪流行腹泻病毒(PEDV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)和伪狂犬病病毒(PRV)发生交叉反应.用该方法对236份猪的鼻拭子样品进行NiV和SIV的同时检测,所有样本的NiV检测结果均为阴性,有1份样本的SIV检测结果为阳性.本研究建立的方法可为猪临床样本中NiV和SIV的鉴别检测提供了一种快速、敏感和特异的技术手段.