草鱼呼肠孤病毒GCRV VP56相互作用蛋白的鉴定

• 作者: 刘海云 吕利群 喻飞 宗乾坤 张娅楠 王浩 陈百朋
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 草鱼 呼肠孤病毒 VP56蛋白 酵母双杂交 GcJAM-A蛋白
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 页码范围: 371-378
• 分类号: Q786|S917
• 语种: 中文
• DOI: 10.11964/jfc.20150710008

摘要

为研究Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒外纤维蛋白VP56与宿主蛋白的相互作用,实验采用酵母双杂交Gal4系统鉴定与VP56相互作用的草鱼蛋白.首先利用RT-PCR技术从Ⅱ型GCRV感染的草鱼肾细胞中扩增目的基因VP56,构建pGBKT7-VP56诱饵表达载体;在酵母菌株中检测其自激活性后,以VP56为诱饵在草鱼酵母双杂交文库中筛选阳性菌株,并对阳性克隆的序列进行分析.实验也克隆了草鱼JAM-A(GcJAM-A)基因,并构建pGADT7-GcJAM-A载体,在酵母中研究草鱼GcJAM-A与病毒蛋白VP56相互作用的可能性.研究表明构建的诱饵质粒pGBKT7-VP56无自激活作用,可以应用于酵母双杂交筛选;从草鱼肾细胞文库中筛选得到9株阳性克隆,基因测序及序列分析确定其中包含草鱼7个细胞内蛋白和1个细胞外基质蛋白;VP56蛋白与GcJAM-A蛋白在酵母中不能发生相互作用.本研究初步确定了与Ⅱ型GCRV蛋白VP56存在潜在相互作用的宿主蛋白,为深入探讨VP56蛋白在Ⅱ型GCRV感染宿主过程中的生物学功能奠定了基础.