细菌纤维素膜作为生物支架构建组织工程角膜上皮的可行性研究

• 作者: 万怡灶 张琛 曹静洁 胡达 赵少贞
• 来源期刊: 中华实验眼科杂志
• 关键词: 角膜上皮/细胞学 组织工程 组织支架/微生物 生物相容材料 细胞培养 兔 细菌纤维素
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 121-124
• 页数: 4页
• 字数: 3505字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2016.02.006

摘要

背景 目前角膜移植仍是治疗严重角膜疾病的主流方法,但角膜供体的不足使角膜移植疗法的应用受到限制.组织工程角膜上皮为角膜移植研究提供了新的途径,其中组织工程角膜的支架研究也是研究热点之一.细菌纤维素膜已作为生物材料广泛用于医药领域,其在组织工程角膜的支架研究方面的应用值得关注. 目的 以细菌纤维素膜作为支架,研究体外培养的兔角膜上皮细胞在细菌纤维素膜上生长情况,评估细菌纤维素膜的生物相容性.方法 收集1月龄的新西兰白兔角膜上皮组织,采用组织块培养法对角膜上皮细胞进行培养和传代,采用免疫荧光技术检测细胞中CK-3的表达对培养的细胞进行鉴定.将第2代兔角膜上皮细胞消化后分别接种于细菌纤维素膜和培养皿,光学显微镜下观察和比较两组细胞的生长情况.于接种后第3天角膜上皮细胞在细菌纤维素膜上贴壁达到融合时加入10 ml含5μl钙黄绿素-AM+20μl溴乙非啶同二聚体的无菌PBS(LIVE/DEAD细胞活性毒性检测),评估2种培养法细胞的活性率.细菌纤维素膜上培养的细胞固定后,扫描电子显微镜下检查角膜上皮细胞的表面超微结构. 结果 兔角膜上皮细胞原代培养后1周左右细胞生长良好,呈铺路石样排列并融合,免疫荧光检测显示培养的细胞CK-3表达阳性.接种于细菌纤维素膜上的细胞生长状态良好,呈圆形或椭圆形,呈铺路石样排列,LIVE/DEAD染色后活细胞细胞核呈绿色荧光,细胞存活率为100％.扫描电子显微镜下细菌纤维素膜上培养的兔角膜上皮细胞呈椭圆形,可见膜表面丰富的页状突起、丝状伪足及细胞间连接,并可观察到处于分裂相的细胞.上皮细胞通过丝状伪足紧密贴附于细菌纤维素膜. 结论 兔角膜上皮细胞在细菌纤维素膜上生长状态良好,细菌纤维素膜有较好的生物相容性,可作为构建组织工程角膜上皮的一种新型生物学材料.