pGH 和 IGF-Ⅰ双基因共表达载体的构建及转双基因猪的获得与检测

• 作者: 吴明明 姚延珠 孙金海
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: pGH 基因 IGF-Ⅰ 基因 共表达 转基因 长白猪
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 页码范围: 94-100
• 页数: 7页
• 分类号: Q78|S828
• 字数: 5382字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.2016.03.014

摘要

旨在构建可高效表达 pGH 基因和 IGF-Ⅰ基因的双基因共表达载体，制备转双基因（pGH ＋IGF-Ⅰ）猪，以期探索 pGH 基因和 IGF-Ⅰ基因对猪生长发育的影响，为节粮型高瘦肉率新品种猪的培育奠定理论基础。从长白猪耳样中提取总 RNA，经反转录 RT-PCR 获得 pGH 基因不含终止密码子的编码序列和 IGF-Ⅰ基因完整的编码序列，经酶切连接克隆至 pcDNA3．1（＋）真核表达载体上，构建 pcDNA3．1（＋）-pGH-IGF-Ⅰ双基因共表达载体。将其转染 PK15细胞，Q-PCR 检测2个目的基因在 PK15细胞中的表达情况。将构建的双基因共表达载体用纳米材料包裹后转染长白猪精子，采用精子载体法制备转双基因猪。PCR 及测序鉴定转双基因阳性个体，Q-PCR 检测2个目的基因在转双基因猪体内的表达情况。PCR 及测序鉴定追踪检测转双基因猪体内 pGH 基因和 IGF-Ⅰ基因的稳定情况。RT-PCR 及测序结果表明，成功克隆了长白猪的 pGH 基因和 IGF-Ⅰ基因的编码序列。酶切和测序分析表明成功构建了双基因真核共表达载体，转染 PK15细胞后，Q-PCR 检测表明，pGH 基因和 IGF-Ⅰ基因均在 mRNA 水平成功表达。母猪妊娠获得13头仔猪，经 PCR 及测序检测，其中4头仔猪为转双基因阳性，转双基因阳性率为30．76％。Q-PCR 检测外源 pGH 基因与 IGF-Ⅰ基因在转双基因猪体内成功表达。1～7月龄均可检测到外源 pGH 基因与 IGF-Ⅰ基因，证明2个外源基因在转双基因猪体内稳定存在，并未随着生长而丢失。在转双基因公猪的精液中均能检测到2个外源基因，证明外源基因存在稳定传代的可能。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙金海	青岛农业大学动物科技学院	40	112	6.0	8.0
2	吴明明	中国农业大学动物科技学院	9	24	3.0	4.0
3	姚延珠	青岛农业大学动物科技学院	2	3	1.0	1.0