猪圆环病毒2d亚型衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达

• 作者: 单虎 李桂梅 袁飞 韩先杰 黄娟
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪圆环病毒2d亚型 衣壳蛋白 杆状病毒表达系统 基因分型
• 年，卷（期）: 2016,（9）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 1346-1353
• 分类号: S855.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2016.09.008

摘要

为了在昆虫细胞中表达猪圆环毒病2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)衣壳蛋白,本研究设计合成引物从临床病料中扩增获得猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)山东株衣壳蛋白基因缺失核定位区的序列,并进行序列分析.将该片段克隆到杆状病毒供体载体pFastBac-1上,然后转化大肠杆菌(Escherichia coli) DH 10-Bac感受态细胞,获得重组穿梭杆粒,将该杆粒转染到sf9昆虫细胞中,观察重组杆状病毒致细胞病变效应,并采用PCR、间接免疫荧光实验、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和Western blot鉴定衣壳蛋白的表达情况.结果表明,扩增获得的猪圆环病毒山东株属于PCV2d亚型,与我国目前使用的商品化疫苗株(PCV2a及PCV2b亚型)在160～180 aa抗原位点有差异.成功构建了重组供体质粒pFastBac l-PCV2d-Cap和重组穿梭杆粒Bacmid-PCV2d-Cap,获得的重组杆状病毒在昆虫细胞中成功表达了约24 kD的PCV2d-Cap,该蛋白可以与猪圆环病毒阳性血清及His标签抗体发生反应,证明具有良好的反应原性.本研究是我国首次采用杆状病毒系统表达PCV2d亚型衣壳蛋白,为制备PCV2d亚单位疫苗以及酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒、防范PCV2d亚型流行提供了理论依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	单虎	青岛农业大学山东省高校预防兽医学重点实验室	183	631	12.0	17.0
2	韩先杰	青岛农业大学山东省高校预防兽医学重点实验室	37	156	7.0	11.0
3	李桂梅	青岛农业大学山东省高校预防兽医学重点实验室	11	12	2.0	3.0
4	黄娟	青岛农业大学山东省高校预防兽医学重点实验室	32	77	6.0	7.0
5	袁飞	青岛农业大学山东省高校预防兽医学重点实验室	1	4	1.0	1.0