His标签的水稻硅转运蛋白表达载体的构建及在巴斯德毕赤酵母中的表达

• 作者: 何建宇 方长旬 李颖哲 林伟伟 林文雄 林瑞余 林红梅
• 来源期刊: 《福建农林大学学报（自然科学版）》
• 关键词: 巴斯德毕赤酵母 Si转运蛋白 pPIC9k 异源表达
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 561-566
• 页数: 6页
• 分类号: Q945.79
• 语种: 中文
• DOI: 10.13323/j.cnki.j.fafu(nat.sci.).2016.05.014

摘要

以水稻根系cDNA为模板,PCR扩增含His标签的Lsi1基因开放阅读框,并将该基因克隆到巴斯德毕赤酵母表达载体pPIC9k中,PCR及测序验证重组质粒pPIC9k-Lsi1目的基因序列.将验证正确的重组质粒pPIC9k-Lsi1通过SacⅠ酶切线性化,电转到毕赤酵母GS115感受态细胞中,通过MD/MM板筛选出甲醇利用快型的酵母转化子,再通过不同浓度梯度的G418平板筛选多拷贝转化菌株.提取酵母基因组,PCR验证正确的菌株即为工程菌(GS115/pPIC9k-Lsi1).用1%甲醇诱导该工程菌72 h后,收集上清,经SDS-PAGE检测到位于32.8 ku处的目的蛋白即为Si转运蛋白(OsLsi1).