猪诺如病毒巢式RT－PCR检测方法的建立与应用

• 作者: 叶昱 吴琼 周信荣 唐玉新 宋德平 张帆帆 张田生 彭棋 李安琪 陈燕君 黄瑫
• 来源期刊: 江西农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪诺如病毒 巢式RT-PCR 同源性分析 系统进化树分析
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 动物科学与水产
• 页码范围: 338-346
• 页数: 9页
• 分类号: S852.65+1
• 字数: 5560字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13836/j.jjau.2016048

摘要

为了解中国猪群中猪诺如病毒感染情况，本研究根据猪诺如病毒保守的RNA依赖性RNA多聚酶（ RNA Dependent RNA Polymerase，RDRP）基因序列设计了一套巢式RT－PCR引物，用该引物从猪粪便样品中扩增出与预期目的产物大小一致的条带，经克隆、测序后获得的序列与GenBank数据库序列比对，证明所扩增的序列属于猪诺如病毒，表明本研究成功建立了猪诺如病毒巢式RT－PCR检测方法。该检测方法具有高特异性和敏感性，应用该方法检测某猪场健康育肥猪粪便样品，阳性率为54．5％。通过RDRP基因进行核苷酸同源比对发现本文获得的猪诺如病毒Wuning 1株属于GII群诺如病毒，与美国猪诺如病毒毒株OH－QW101／03／US、中国猪诺如病毒毒株Norovirus pig／GII／Ch6／China／2009核苷酸序列同源性最近。值得注意的是猪诺如病毒Wun?ing1毒株与武汉人诺如病毒毒株E2120／CHN／2010核苷酸同源性高达77．1％，说明猪诺如病毒Wuning 1毒株与武汉人诺如病毒基因组上亲缘性较近。本研究成功建立了一种检测猪诺如病毒的巢式RT?PCR方法，并应用于临床猪粪便样品的检测，为猪诺如病毒的诊断与监测提供了可供借鉴的方法、为猪诺如病毒的进化、分子病毒学及与人诺如病毒关系的深入研究提供依据。