靶向PD-L1基因的CRISPR/Cas9基因敲除质粒的构建

• 作者: 余祖江 孙冉冉 李娟 李晶晶 申申 阚全程 陈晓龙
• 来源期刊: 郑州大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: PD-L1 肿瘤免疫 CRISPR/Cas9 基因敲除
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 22-27
• 页数: 6页
• 分类号: Q781
• 字数: 3448字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13705/j.issn.1671-6825.2016.01.006

摘要

目的:构建靶向PD-L1基因的CRISPR/Cas9基因敲除质粒.方法:根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,设计并合成靶向PD-L1基因的5对sgRNA序列.为了进一步降低克隆背景和提高构建阳性率,在受体载体中引入毒性蛋白系统(Ccd).构建pX459-CcdB重组载体,将pX459-CcdB载体进行BbsⅠ酶切,将sgRNA插入到pX459-CcdB骨架载体中,转化到不含CcdA基因的宿主菌Stbl3中.酶切不完全引起的背景载体将因毒性蛋白的作用杀死宿主菌.转化后挑取阳性克隆,进行PCR和测序验证.结果与结论:经PCR和测序验证,重组质粒pX459-PD-L1-sgRNA构建成功,为下一步体内外敲除PD-L1基因和深入研究其在肿瘤免疫逃逸中的功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	阚全程	郑州大学第一附属医院药学部	129	657	13.0	21.0
2	李娟	郑州大学第一附属医院感染科	102	348	9.0	13.0
3	余祖江	郑州大学第一附属医院感染科	170	476	10.0	13.0
4	李晶晶	郑州大学第一附属医院感染科	33	51	4.0	6.0
5	孙冉冉	郑州大学第一附属医院感染科	5	7	2.0	2.0
6	陈晓龙	郑州大学第一附属医院感染科	5	8	2.0	2.0
7	申申	郑州大学第一附属医院感染科	1	1	1.0	1.0