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摘要:
目的:构建靶向PD-L1基因的CRISPR/Cas9基因敲除质粒.方法:根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,设计并合成靶向PD-L1基因的5对sgRNA序列.为了进一步降低克隆背景和提高构建阳性率,在受体载体中引入毒性蛋白系统(Ccd).构建pX459-CcdB重组载体,将pX459-CcdB载体进行BbsⅠ酶切,将sgRNA插入到pX459-CcdB骨架载体中,转化到不含CcdA基因的宿主菌Stbl3中.酶切不完全引起的背景载体将因毒性蛋白的作用杀死宿主菌.转化后挑取阳性克隆,进行PCR和测序验证.结果与结论:经PCR和测序验证,重组质粒pX459-PD-L1-sgRNA构建成功,为下一步体内外敲除PD-L1基因和深入研究其在肿瘤免疫逃逸中的功能奠定了基础.
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基因敲除
CRISPR/Cas9
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文献信息
篇名 靶向PD-L1基因的CRISPR/Cas9基因敲除质粒的构建
来源期刊 郑州大学学报(医学版) 学科 生物学
关键词 PD-L1 肿瘤免疫 CRISPR/Cas9 基因敲除
年,卷(期) 2016,(1) 所属期刊栏目 论著
研究方向 页码范围 22-27
页数 6页 分类号 Q781
字数 3448字 语种 中文
DOI 10.13705/j.issn.1671-6825.2016.01.006
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 阚全程 郑州大学第一附属医院药学部 129 657 13.0 21.0
2 李娟 郑州大学第一附属医院感染科 102 348 9.0 13.0
3 余祖江 郑州大学第一附属医院感染科 170 476 10.0 13.0
4 李晶晶 郑州大学第一附属医院感染科 33 51 4.0 6.0
5 孙冉冉 郑州大学第一附属医院感染科 5 7 2.0 2.0
6 陈晓龙 郑州大学第一附属医院感染科 5 8 2.0 2.0
7 申申 郑州大学第一附属医院感染科 1 1 1.0 1.0
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研究主题发展历程
节点文献
PD-L1
肿瘤免疫
CRISPR/Cas9
基因敲除
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期刊影响力
郑州大学学报(医学版)
双月刊
1671-6825
41-1340/R
大16开
郑州市大学路40号
36-111
1957
chi
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