半滑舌鳎CD40基因克隆及其免疫功能分析

• 作者: 位战飞 刘洋 戴欢 朱颖 李海龙 王文文 董忠典 郑卫卫 郭华
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 半滑舌鳎 CD40基因 克隆 荧光定量 哈维氏弧菌
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1063-1072
• 页数: 10页
• 分类号: S917
• 字数: 6701字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1118.2016.15469

摘要

本研究通过RACE技术在半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)中克隆得到1个CD40同源基因.该基因cDNA全长为2098 bp,开放阅读框为1011 bp,可编码由336个氨基酸组成的蛋白质.推导得到的CD40氨基酸序列包含1个信号肽、1个跨膜结构区、2个N-糖基化位点以及含4个富含半胱氨酸的保守结构区.不同物种氨基酸序列同源分析结果显示,该基因与哺乳类、两栖类以及硬骨鱼类相似性为28％～47％,其中与硬骨鱼类相似性较高.系统进化分析结果显示,半滑舌鳎CD40与其他硬骨鱼类CD40聚类为一支,哺乳类与两栖类CD40聚类为另一支.荧光定量PCR结果显示,CD40在健康半滑舌鳎不同组织中均有表达,其中在鳃、肝和脾等组织中表达量较高,在肠、肌肉和皮肤中表达量较低,在脑和肾中微量表达.经哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)感染刺激后,与PBS处理的对照组相比,该基因mRNA在半滑舌鳎3个主要免疫组织(肝、脾和肾)中表达量均呈显著性升高,在肝中12 h到达峰值,在脾和肾中6h达到峰值.上述结果表明CD40基因参与了半滑舌鳎抵抗哈维氏弧菌的免疫应答反应.