TaqMan-MGB荧光定量IC/TC-RT-PCR检测菜豆荚斑驳病毒

• 作者: 吴祖建 廖富荣 沈建国 蔡伟 金晶 高芳銮
• 来源期刊: 大豆科学
• 学科: 农学
• 关键词: TaqMan-MGB荧光定量IC-RT-PCR TaqMan-MGB荧光定量TC-RT-PCR 菜豆荚斑驳病毒 检测
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 分析加工
• 页码范围: 489-493
• 分类号: S565.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.11861/j.issn.1000-9841.2016.03.0489

摘要

菜豆荚斑驳病毒(Bean pod mottle virus,BPMV)是我国重要的检疫性有害生物,BPMV传入的风险随大豆进境数量增多而加大.本文针对菜豆荚斑驳病毒,以大豆种子提取液为材料,分别建立了TaqMan-MGB荧光定量IC-RT-PCR和TaqMan-MGB荧光定量TC-RT-PCR快速检测方法.根据GenBank公布的BPMV外壳蛋白基因序列,选择其保守区域,设计1对特异性引物和l条TaqMan-MGB探针,测定了TaqMan-MGB荧光定量IC-RT-PCR和TaqMan-MGB荧光定量TC-RT-PCR方法的特异性和灵敏度,并将TaqMan-MGB荧光定量IC-RT-PCR、TaqMan-MGB荧光定量TC-RT-PCR、IC-RT-PCR和TC-RT-PCR 4种检测方法的灵敏度进行比较.结果表明:所建立的两种检测方法特异性良好;TC-RT-PCR的灵敏度为10-1倍病毒提取液原液;IC-RT-PCR和TaqMan-MGB荧光定量TC-RT-PCR灵敏度相当,为10-3倍病毒提取液原液;TaqMan-MGB荧光定量IC-RT-PCR灵敏度最高,为10-5倍病毒提取液原液,是IC-RT-PCR和Taq-Man-MGB荧光定量TC-RT-PCR检测方法的102倍,是TC-RT-PCR检测方法的104倍;两种检测方法均能较好应用于实际大豆样品的检测.本文所建立的TaqMan-MGB荧光定量IC/TC-RT-PCR检测方法利用抗原特异性或试管非特异性捕捉病毒粒子,无需提取RNA,为进境大豆种子上BPMV的检测提供了稳定、快速、简便的技术依据,其较高的灵敏度和特异性具有较好的应用价值.