大菱鲆血清免疫球蛋白IgM单克隆抗体的制备及其特性分析

• 作者: 唐小千 张伟 战文斌 绳秀珍 邢婧
• 来源期刊: 中国海洋大学学报（自然科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 大菱鲆 血清IgM 单克隆抗体 免疫荧光 流式细胞术
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 27-32
• 页数: 6页
• 分类号: S91
• 字数: 3872字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16441/j.cnki.hdxb.20140430

摘要

本研究运用硫酸铵盐析法结合Protein A亲和层法从大菱鲆血清中分离、纯化免疫球蛋白IgM.SDS-PAGE分析结果显示,纯化的血清IgM主要有2条蛋白带,分子量分别为78和27 kDa,分别为大菱鲆IgM的重链与轻链.以纯化的IgM免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合,将融合后的细胞置于含HAT的培养基中培养.利用ELISA和Western blotting筛选杂交瘤,并利用有限稀释法对阳性杂交瘤进行单克隆,最终共获得3株抗大菱鲆血清IgM单克隆抗体,分别命名为1B2、1G4和2A1,抗体分型结果显示3株单抗均属IgG.Western blotting结果显示,单抗1B2和1G4可特异性识别大菱鲆IgM重链蛋白,而单抗2A1则特异性识别轻链蛋白.同时,以制备的腹水单抗1G4结合免疫荧光检测显示,单抗1G4可识别大菱鲆外周血、脾及前肾组织中表面IgM阳性(sIgM+)细胞;流式细胞术分析显示,大菱鲆外周血、脾和前肾白细胞中sIgM+细胞比例分别为48.07％,20.05％和18.45％.研究结果显示,制备的抗大菱鲆血清IgM单抗特异性高、反应性强,可为研究大菱鲆免疫系统及免疫应答动态提供有力的工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张伟	中国海洋大学水产动物病害与免疫学研究室	57	390	10.0	19.0
2	唐小千	中国海洋大学水产动物病害与免疫学研究室	31	124	6.0	9.0
3	绳秀珍	中国海洋大学水产动物病害与免疫学研究室	56	404	11.0	18.0
4	战文斌	中国海洋大学水产动物病害与免疫学研究室	97	1155	20.0	30.0
5	邢婧	中国海洋大学水产动物病害与免疫学研究室	46	478	11.0	20.0